Gramkleuring
Dit is een differentiële kleuring: je kunt onderscheid maken, het is een eerste stap bij de identificatie van bacteriën. Hiervan zijn vele variaties. Deze is vanwege de houdbaarheid van de kristalviolet oplossing het meest geschikt voor gebruik op school. Het is de gramkleuring volgens Hucker, waarbij als tegenkleurstof voor saffranine is gekozen i.p.v. fuchsine (carcinogeen?).
Let op! Alleen jonge culturen gebruiken, veroudering en verzuring maakt grampositieve bacteriecellen gramnegatief. Er zijn ook alternatieven.
Op de foto hier grampositieve cellen en gramnegatief geworden cellen in een oude cultuur van Staphylococcus aureus.
UITVOERING :
Kleur met kristalviolet: 1 minuut
Afgieten, niet spoelen
Kleur met lugol : 1 minuut
Afgieten, niet spoelen met water
Spoel met ethanol 96%
Laat alcohol inwerken : 1 minuut
Spoel met water
Kleur met saffranine : 1 minuut
Spoel met water
Droog het preparaat.
Resultaat: grampositieve bacteriën paarsblauw,
gramnegatieve bacteriën lichtrood
Reagentia gramkleuring
Hucker's kristalvioletoplossing:
Maak 80 ml 10% ammoniumoxalaatoplossing in water. Los de stof op door het een nacht in water te laten staan en/of te verwarmen. Voeg hieraan toe:10 ml alcoholische verzadigde kristalvioletoplossing en 10 ml 96% ethanol. Laat 2 dagen staan en filtreer door een nat filter.
Lugol:
Weeg 1 gram jodium af en 2 gram kaliumjodide. Breng dit in een mortier, wrijf het fijn en los het geleidelijk op in 500 ml gedestilleerd water.
Saffranine (0,5%)
Voeg aan 90 ml gedestilleerd water 10 ml verzadigde alcoholische saffranineoplossing toe. Filtreer door een nat filter.
De kleurstoffen zijn ook kant en klaar als setje te koop.