Verdunnen en voorbereiden onderzoek kiemgetal

 

Microbiologisch onderzoek vergt altijd voorbereidingen, vooral omdat alle benodigdheden steriel moeten zijn. Je moet dus van te voren weten wat je allemaal nodig hebt

  • Het plannen en steriliseren

Het handigste is om een schema te tekenen van de proef, bijvoorbeeld de bepaling van een kiemgetal. Zie naslagwerk Microbiologie technieken op de praktijkzaal. .
Je kunt dan zien wat je nodig hebt aan pfz, flesjes, buizen, pipetten en medium en het vervolgens maken en steriliseren.

  • Het homogeniseren


Een vast monster 

Voordat het eigenlijke onderzoek begint moet een vast product in een vloeistof gebracht worden en hierin gelijkmatig verdeeld worden (gesuspendeerd en gehomogeniseerd) , anders kan het niet gepipetteerd worden, een vast monster kan dus nooit onverdund (op levende micro-organismen) worden onderzocht.

Er wordt een bepaald hoeveelheid monster, bijvoorbeeld 10 gram van een gebakje bij een bekend volume steriele verdunningsvloeistof bijvoorbeeld 90 ml pfz gebracht. Hierbij wordt het gebakje 10 keer verdund.

Pfz is een afkorting voor pepton-fysiologisch zout. In deze oplossing (0,9% NaCL, 0,1% pepton) overleven de te bepalen micro-organismen beter dan in water.

Vervolgens worden monster en vloeistof zeer goed gemengd waarbij het gebakje in kleine stukjes uiteenvalt en de micro-organismen vanaf het product de vloeistof ingaan. Dit suspenderen gebeurt in een steriele mixer of in een stomacher. 

Een stomacher is een suspendeerapparaat waarin een plastic zakje kan worden gehangen. In dit zakje bevindt zich het afgewogen monster en de verdunningsvloeistof. Sluit je het apparaat dan kun je het aanzetten en gaan twee ijzeren plaatjes in een hoog tempo om de beurt op het zakje drukken. Daarna is het monster pipetteerbaar en geschikt om onderzocht en/of verder verdund te worden.  

Een vloeibaar monster

Een vloeibaar monster kan in principe direct worden onder­zocht, vergeet echter nooit goed te schudden, de kans is groot dat de kleine beestjes op de bodem liggen en zonder te schudden zit je dan de 'lege' bovenstaande vloeistof te onderzoeken!!! 

         

  • Het aanleggen van een verdunningsreeks

Vaak  zitten er zoveel micro-organismen per ml in zodat na schudden eerst verdund moet worden.
Om een betrouwbaar resultaat te krijgen is het noodzakelijk om tijdens het maken van een verdunningsreeks monster en verdunningen goed te mengen en bij elke verdunningsstap een nieuwe pipet te nemen. Hieronder een voorbeeld:

verdunning van een ijsje

Hoe vaak moet je verdunnen? Klik hier voor verdere uitleg